本發(fā)明涉及一種用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)，其中該受試者優(yōu)選接受檢查點(diǎn)阻斷療法作為癌癥療法。本發(fā)明還涉及包含脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的組合藥物，用于組合使用來治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)，其中該治療還包括將受試者的血液樣品用紫外線a(uva)體外照射，優(yōu)選采用體外光分離置換(ecp)療法。

背景技術(shù)：

1、免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)已被證明在多種癌癥的治療中具有臨床益處。免疫檢查點(diǎn)阻斷通過阻斷免疫的負(fù)調(diào)節(jié)物(諸如細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞抗原4(ctla-4)、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(pd-1)或程序性細(xì)胞死亡配體-1(pd-l1))來增強(qiáng)抗腫瘤免疫。由icb療法引起的免疫介導(dǎo)的器官組織損傷被歸類為免疫相關(guān)不良事件(irae)。irae可影響任何器官系統(tǒng)，最常見的涉及胃腸道、肺、內(nèi)分泌腺、皮膚和肝臟。

2、irae的治療包括根據(jù)irae的嚴(yán)重程度停止icb療法和/或施用糖皮質(zhì)類固醇。這些措施帶來了缺乏icb療法和免疫抑制降低抗腫瘤免疫應(yīng)答的風(fēng)險。迄今為止，尚無隨機(jī)試驗分析糖皮質(zhì)類固醇對icb治療患者的抗腫瘤免疫作用的影響，并且回顧性數(shù)據(jù)也存在爭議。

3、另外，糖皮質(zhì)類固醇引起嚴(yán)重的副作用，包括高血糖、液體潴留、心理障礙、醫(yī)源性腎上腺皮質(zhì)功能不全(如果糖皮質(zhì)激素減量過快)和感染性并發(fā)癥。

4、此外，二線療法諸如tnf拮抗劑可干擾抗腫瘤作用，因為已顯示tnf對于血液惡性腫瘤中的抗腫瘤作用是必需的(schmaltz等人，2003年)，并且針對自身免疫的tnf阻斷與淋巴增生性癌癥和非黑色素瘤皮膚癌風(fēng)險的數(shù)值增加有關(guān)。一項回顧性研究分析了790名接受icb治療的晚期黑色素瘤患者，報告稱接受糖皮質(zhì)激素或英夫利昔單抗(tnf拮抗劑)治療的患者亞組中嚴(yán)重感染的發(fā)生率為13.5％。最近的臨床研究表明，tnf阻斷以及免疫療法與50％的患者對icb無應(yīng)答有關(guān)。

5、總之，目前對于icb后出現(xiàn)嚴(yán)重irae(3級和4級)的患者，采用完全且持久的免疫療法中斷和糖皮質(zhì)類固醇的施用來治療。這兩種干預(yù)都可能對抗腫瘤免疫應(yīng)答產(chǎn)生負(fù)面影響。目前沒有前瞻性隨機(jī)試驗支持使用糖皮質(zhì)類固醇或二線療法，諸如經(jīng)常使用的霉酚酸酯(mmf)、tnf拮抗劑或環(huán)孢霉素a的方法。缺乏有效對抗irae的新方法。

6、因此，干擾irae而不減少抗腫瘤作用并且?guī)缀醪灰鹑硇愿弊饔玫男滦椭委煼椒ㄊ巧形礉M足的醫(yī)療需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明潛在的技術(shù)問題是提供用于治療irae的改進(jìn)的治療策略，尤其是在icb療法期間，該治療策略不會干擾icb介導(dǎo)的抗腫瘤作用，并且比現(xiàn)有技術(shù)的糖皮質(zhì)激素治療引起更少的副作用。

2、該問題通過本文公開的特征(包括獨(dú)立權(quán)利要求和從屬權(quán)利要求的特征)來解決。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在體外光分離置換(ecp)療法的背景下單獨(dú)施用脂聯(lián)素或組合施用脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)以及光敏劑都可成功地用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)。

3、發(fā)明人之前已經(jīng)成功地將體外光分離置換(ecp)應(yīng)用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎(apostolova等人，2020年)。目前，當(dāng)分析ecp減輕icb后結(jié)腸炎的機(jī)制時，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)ecp引起腸道中脂聯(lián)素的表達(dá)，從而導(dǎo)致髓樣細(xì)胞釋放精氨酸酶-1(arg-1)以及t細(xì)胞活化減少和調(diào)節(jié)性klrg1+btla+cd47+tox低t細(xì)胞擴(kuò)增。脂聯(lián)素的產(chǎn)生是由腸道中的巨噬細(xì)胞吞噬的凋亡細(xì)胞誘導(dǎo)的。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，ecp減少了小鼠中icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的臨床和組織學(xué)體征，以及浸潤irae靶器官的致病性熒光素酶轉(zhuǎn)基因t細(xì)胞的體內(nèi)擴(kuò)增。用抗pd1治療的荷黑色素瘤小鼠中的抗腫瘤免疫力在ecp治療期間保持完整，而皮質(zhì)類固醇則降低抗黑色素瘤免疫作用。與在小鼠中的發(fā)現(xiàn)一致，ecp在irae患者的血液和腸組織中誘導(dǎo)脂聯(lián)素。

4、發(fā)明人將ecp鑒定為一種新型免疫調(diào)節(jié)療法，其通過激活脂聯(lián)素/arg-1軸并通過直接作用于t細(xì)胞和巨噬細(xì)胞來控制icb誘導(dǎo)的irae諸如結(jié)腸炎。使用基因功能缺失方法(脂聯(lián)素ko、精氨酸酶-1ko小鼠)和藥理學(xué)干預(yù)，發(fā)明人可證明脂聯(lián)素/arg-1軸在ecp保護(hù)作用中的功能性作用。

5、發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)的施用增強(qiáng)了ecp在治療icb誘導(dǎo)的irae中的活性，這可被觀察到，例如，在icb治療期間/之后腸道炎癥減輕和體重減輕變少。

6、因此，本發(fā)明在第一方面涉及包含物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的組合藥物，用于組合使用來治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)，其中該治療(還)包括將受試者的血液樣品用紫外線a(uva)體外照射，優(yōu)選采用體外光分離置換(ecp)療法。

7、在優(yōu)選實施方案中，在體外uva照射受試者的血液樣品之前，將光敏劑離體施用于受試者的血液樣品。在優(yōu)選實施方案中，受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法，例如作為癌癥療法。

8、出乎意料的是，發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)施用脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)也能降低并預(yù)防icb誘導(dǎo)的irae。

9、因此，本發(fā)明在另一方面涉及用于治療或預(yù)防受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)。在優(yōu)選實施方案中，受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法，例如作為癌癥療法。

10、icb檢查點(diǎn)阻斷療法通常包括施用至少一種抗體、優(yōu)選至少兩種抗體，這些抗體優(yōu)選選自包括以下的組：細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞抗原4(ctla-4)、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(pd-1)和/或程序性細(xì)胞死亡配體-1(pd-l1)或淋巴細(xì)胞活化基因3(lag-3)。在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，在施用檢查點(diǎn)阻斷療法之前至少一小時、期間和/或之后至少一小時施用脂聯(lián)素和/或ara。

11、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，在施用檢查點(diǎn)阻斷療法后至少1分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘或60分鐘，或至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、24小時、36小時或48小時，或至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、21天、28天、30天或至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、20周、24周或52周施用脂聯(lián)素和/或ara。在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，在施用檢查點(diǎn)阻斷療法前至少1分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘或60分鐘，或至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、24小時、36小時或48小時，或至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、21天、28天、30天或至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、20周、24周或52周施用脂聯(lián)素和/或ara。在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，在施用檢查點(diǎn)阻斷療法期間，至少每日一次施用脂聯(lián)素和/或ara持續(xù)至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、21天、28天、30天或至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、20周、24周或52周。

12、至少每日一次施用脂聯(lián)素和/或ara，優(yōu)選地在施用檢查點(diǎn)阻斷療法期間持續(xù)至少2周至5周，更優(yōu)選地在施用檢查點(diǎn)阻斷療法期間持續(xù)至少3周。

13、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，受試者患有癌癥。

14、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，癌癥選自包括以下的組：惡性黑色素瘤、乳腺癌或能夠通過檢查點(diǎn)阻斷療法治療的另一種癌癥，例如本文公開的任何癌癥。

15、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，檢查點(diǎn)阻斷療法包括施用至少一種抗體、優(yōu)選至少兩種抗體。

16、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，該至少一種抗體選自包括以下的組：細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞抗原4(ctla-4)、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(pd-1)和/或程序性細(xì)胞死亡配體-1(pd-l1)或淋巴細(xì)胞活化基因3(lag-3)。

17、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，irae可涉及任何器官，優(yōu)選胃腸道、肺、內(nèi)分泌腺、皮膚和/或肝臟。

18、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，irae包括icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

19、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，脂聯(lián)素和/或ara的施用減少icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

20、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，(至少部分地)由于組織特異性脂聯(lián)素誘導(dǎo)，脂聯(lián)素和/或ara的施用不干擾由檢查點(diǎn)阻斷療法誘導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答，該檢查點(diǎn)阻斷療法優(yōu)選地為抗pd1治療。

21、在根據(jù)本發(fā)明使用的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，由腫瘤微環(huán)境中的t細(xì)胞介導(dǎo)的抗pd-1誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答不會因脂聯(lián)素和/或ara的施用而受損，其中完整的抗腫瘤免疫應(yīng)答優(yōu)選地通過回憶免疫實驗來證明。

22、在另一方面，本發(fā)明涉及用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物，該組合藥物包含以下組分中的至少兩者：a.脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和b.光敏劑，

23、并且其中該治療還包括將所述受試者的血液樣品用紫外線a(uva)體外照射、優(yōu)選體外光分離置換(ecp)處理。

24、在優(yōu)選實施方案中，在將血液樣品用紫外線a(uva)體外照射、優(yōu)選體外光分離置換(ecp)處理之前，將光敏劑離體施用于血液樣品。

25、在實施方案中，用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物包含以下組分：

26、a.脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)、

27、b.光敏劑和

28、c.受試者的血液樣品和/或從中提取的淋巴細(xì)胞、優(yōu)選t細(xì)胞，

29、其中血液樣品和/或從中提取的淋巴細(xì)胞已離體經(jīng)受光敏劑處理，隨后經(jīng)受紫外線a(uva)體外照射、優(yōu)選體外光分離置換(ecp)。

30、換句話講，在實施方案中，用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物包含物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)、光敏劑以及血液樣品和/或包含在血液樣品中或從中提取的淋巴細(xì)胞(優(yōu)選t細(xì)胞)，其中血液樣品和/或淋巴細(xì)胞已經(jīng)受體外處理，該體外處理包括(i)向血液樣品和/或淋巴細(xì)胞施用光敏劑，以及隨后(ii)用紫外線a(uva)進(jìn)行體外照射、優(yōu)選體外光分離置換(ecp)。

31、在實施方案中，用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物包含：

32、a.脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)、

33、b.光敏劑和

34、c.白細(xì)胞、優(yōu)選(免疫調(diào)節(jié)性)t細(xì)胞，這些細(xì)胞從包括以下步驟的方法獲得：

35、(i)提供從該受試者的分離的血液樣品獲得的樣品，

36、(ii)向該樣品中加入該光敏劑，以及

37、(iii)使該樣品經(jīng)受uva照射、優(yōu)選ecp處理。

38、如實施例中所示，根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行ecp處理的樣品的施用的積極作用和功效可能至少部分歸因于血液樣品中所含的白細(xì)胞(特別是t細(xì)胞)的功能的調(diào)節(jié)，其中所述調(diào)節(jié)是在光敏劑存在下照射的結(jié)果。因此，本發(fā)明還涵蓋白細(xì)胞、優(yōu)選淋巴細(xì)胞、更優(yōu)選t細(xì)胞、甚至更優(yōu)選免疫調(diào)節(jié)/免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞，作為與脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)的組合藥物，用于組合使用來治療和/或預(yù)防接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者的免疫相關(guān)不良事件(irae)。優(yōu)選地，免疫調(diào)節(jié)t細(xì)胞通過使來自人、優(yōu)選已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)irae的受試者的血液、白細(xì)胞層、淋巴細(xì)胞和/或mnc細(xì)胞經(jīng)受本文所述的ecp方法而產(chǎn)生，并且隨后用于治療已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)irae的受試者，該受試者優(yōu)選是血液和/或細(xì)胞供體。

39、在優(yōu)選實施方案中，在用光敏劑和uva照射處理之前，使受試者的血液樣品經(jīng)受體外離心，使得僅白細(xì)胞層(優(yōu)選地包含淋巴細(xì)胞和任選的其他白細(xì)胞和血小板)經(jīng)受用光敏劑和uva照射的體外處理，并且優(yōu)選之后輸回受試者。

40、在優(yōu)選實施方案中，受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法。

41、本發(fā)明還涉及用于治療受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物，其中該組合藥物包含：

42、(i)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)、

43、(ii)光敏劑和

44、(iii)封閉式體外光分離置換(ecp)系統(tǒng)，

45、其中該封閉式ecp系統(tǒng)與該受試者的血管系統(tǒng)、優(yōu)選地靜脈系統(tǒng)形成閉合回路。

46、在優(yōu)選實施方案中，在封閉式ecp系統(tǒng)中通過靜脈導(dǎo)管從受試者的靜脈接收血液樣品，其中在ecp系統(tǒng)內(nèi)通過離心將白細(xì)胞層與殘留血液分離之后，隨后將殘留血液重新引入受試者的靜脈中，同時將白細(xì)胞層在ecp系統(tǒng)內(nèi)與光敏劑混合或組合并經(jīng)受uva照射，最后將經(jīng)處理和照射的白細(xì)胞層和/或來源于其的淋巴細(xì)胞通過靜脈導(dǎo)管重新輸注到受試者的靜脈中。

47、在優(yōu)選實施方案中，白細(xì)胞層包含t細(xì)胞。在優(yōu)選實施方案中，重新輸注的白細(xì)胞層包含免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞。

48、在本發(fā)明的實施方案中，光敏劑是補(bǔ)骨脂素試劑、優(yōu)選8-甲氧基補(bǔ)骨脂素。優(yōu)選地，本文對血液樣品、其級分或源自其的細(xì)胞的“ecp方法”或“ecp處理”包括在其uva照射之前用光敏劑處理或混合所述血液樣品、其級分或源自其的細(xì)胞。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，將光敏劑離體/體外施用于受試者的血液樣品或其級分。

49、本發(fā)明的方面基于以下發(fā)現(xiàn)：已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法(例如，作為癌癥治療)的患者如果出現(xiàn)irae，可通過施用脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑并隨后使用紫外線a(uva)對受試者的血液樣品進(jìn)行體外照射(優(yōu)選應(yīng)用ecp)來有效治療。在優(yōu)選實施方案中，ecp基本上是指包括將光敏劑體外添加到irae患者的血液樣品或血液來源樣品中，并使樣品經(jīng)受體外uva輻射的方法。研究發(fā)現(xiàn)，實施這種組合治療方法會降低受試者中irae的發(fā)生率和嚴(yán)重程度，同時不會損害icb療法的抗癌作用。

50、在根據(jù)本發(fā)明的用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法。

51、在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療和/或預(yù)防受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘發(fā)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物，該組合藥物包含脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)以及從包括以下步驟的方法獲得的淋巴細(xì)胞：

52、-提供從該受試者的分離的血液樣品獲得的樣品，

53、-向該樣品中加入光敏劑，以及

54、-使該樣品經(jīng)受uva照射，

55、其中優(yōu)選地，該受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法，例如作為癌癥療法。在優(yōu)選實施方案中，淋巴細(xì)胞包括(免疫調(diào)節(jié)性)klrg1+btla+cd47+tox低t細(xì)胞。因此，在優(yōu)選實施方案中，用于治療和/或預(yù)防受試者中免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘發(fā)的免疫相關(guān)不良事件(irae)的組合藥物包含脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)以及從包括以下步驟的方法獲得的(免疫調(diào)節(jié)性)t細(xì)胞：

56、-提供從受試者的分離的血液樣品獲得的樣品，

57、-向該樣品中加入光敏劑，以及

58、-使該樣品經(jīng)受uva照射，

59、其中優(yōu)選地，該受試者正在接受或已接受檢查點(diǎn)阻斷療法，例如作為癌癥療法。本發(fā)明的該方面基于以下觀察：在添加光敏劑之后經(jīng)歷照射的血液來源樣品中包含的t細(xì)胞采用免疫調(diào)節(jié)性表型，當(dāng)將所得細(xì)胞與脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)的施用組合用于治療和/或預(yù)防受試者的irae時，該免疫調(diào)節(jié)性表型是特別有利的。在優(yōu)選實施方案中，用于產(chǎn)生本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的血液樣品來自已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)免疫相關(guān)不良事件(irae)的癥狀的受試者。該實施方案是特別有利的，因為細(xì)胞對于所述患者是自體的，并且在移植異源細(xì)胞時不會發(fā)生不良事件。

60、優(yōu)選地，用于這種治療或預(yù)防的免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞是通過將光敏劑加入到來自人受試者血液樣品的樣品中，然后使該樣品經(jīng)受uva照射而產(chǎn)生的。向血液來源樣品添加光敏劑并使該樣品經(jīng)受uva照射，優(yōu)選在所述樣品中產(chǎn)生或誘導(dǎo)(形成)免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞。

61、在優(yōu)選實施方案中，光敏劑是8-甲氧基補(bǔ)骨脂素并且/或者照射是uva照射。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選通過體外光分離置換(ecp)系統(tǒng)進(jìn)行照射?？墒褂眉夹g(shù)人員已知的任何合適的系統(tǒng)或照射裝置進(jìn)行血液樣品的照射。

62、根據(jù)本發(fā)明的ecp處理或ecp方法涉及包括以下步驟的方法：

63、-提供從受試者的血液樣品獲得的樣品，該受試者已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)免疫相關(guān)不良事件(irae)的癥狀，

64、-向該樣品中加入光敏劑，以及

65、-使該樣品經(jīng)受uva照射、優(yōu)選體外光分離置換(ecp)療法。

66、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物的優(yōu)選實施方案中，脂聯(lián)素和/或ara在受試者的樣品的ecp處理之前、期間和/或之后施用，其中該ecp處理包括用光敏劑體外(離體)處理患者的血液樣品并使該樣品經(jīng)受體外(離體)uva照射，并且其中該組合藥物優(yōu)選地還包括將所述ecp處理的血液樣品、其級分和/或源自其的淋巴細(xì)胞輸回受試者。在優(yōu)選實施方案中，在ecp處理之前，使受試者的血液樣品經(jīng)受體外離心，使得僅白細(xì)胞層(優(yōu)選地包含淋巴細(xì)胞和任選的其他白細(xì)胞和血小板)經(jīng)受用光敏劑和uva照射的體外處理，并且優(yōu)選之后輸(回)受試者。

67、來自受試者的血液樣品(諸如特別是包含單核細(xì)胞(mnc)的血液樣品)的組合ecp處理導(dǎo)致在所述樣品中產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞。在該上下文中，“產(chǎn)生”免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞應(yīng)理解為誘導(dǎo)或誘發(fā)樣品中此類細(xì)胞的形成。換句話講，樣品中包含的細(xì)胞分化成或采用免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的表型。

68、發(fā)現(xiàn)由根據(jù)本發(fā)明的ecp處理產(chǎn)生的樣品、特別是該樣品所包含的誘導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞可用于治療irae患者。可以證明的是，向已接受與脂聯(lián)素/ara組合的檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者施用經(jīng)過本發(fā)明的方法處理的這種樣品或這種樣品所包含的細(xì)胞，在預(yù)防irae的發(fā)生方面、甚至在治療受試者中已確定的irae方面是有效的。當(dāng)與僅用一種藥物治療受試者相比時，包含脂聯(lián)素和/或ara和受試者的經(jīng)ecp處理的血液樣品或從中提取的淋巴細(xì)胞的組合藥物在預(yù)防或治療icb誘導(dǎo)的irae方面甚至表現(xiàn)出協(xié)同作用。

69、完全出乎意料的是，包括施用脂聯(lián)素和/或ara并使用由本發(fā)明的ecp方法產(chǎn)生的樣品或細(xì)胞的療法甚至是其他免疫抑制療法(諸如類固醇或抗tnf抗體)難治的并且在檢查點(diǎn)抑制劑治療停止后繼續(xù)表現(xiàn)出irae癥狀或仍患有irae的irae患者有效。

70、重要的是，可對已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的同一受試者的樣品進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的ecp處理。因此，可將由本發(fā)明的方法產(chǎn)生的細(xì)胞或樣品施用于作為血液供體的同一受試者，因此所得樣品可代表自體細(xì)胞療法。在其他實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的ecp處理可對另一個受試者的樣品進(jìn)行，該另一個受試者是接受icb治療的受試者的相容供體，因此所得樣品可代表異源細(xì)胞療法。

71、如本文所用，術(shù)語“正在接受或已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者”包括目前正在接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者，或已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法但已停止(例如在irae癥狀出現(xiàn)后)或完成的受試者。

72、在實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的ecp處理在體外或離體進(jìn)行。如本文所用，術(shù)語體內(nèi)和離體同義使用。在本發(fā)明的上下文中，這些術(shù)語涉及對已從人體中取出的血液來源樣品進(jìn)行的方法，其中本發(fā)明的方法對人體外部的血液來源樣品進(jìn)行。為此，將供體受試者的血液從身體中抽出，這意味著從生理循環(huán)系統(tǒng)中抽出。如本文所用，“分離的血液樣品”是從供體的循環(huán)系統(tǒng)移至人體外某一位置的血液樣品(意指一定體積的血液)。這種分離的血液樣品可經(jīng)受或引入體外光分離置換(ecp)系統(tǒng)或血液分離系統(tǒng)，以執(zhí)行本發(fā)明方法的至少某些步驟。其中，這種系統(tǒng)可以是與受試者的血液循環(huán)系統(tǒng)流體連接的在線系統(tǒng)。在替代實施方案中，該方法可離線進(jìn)行，其中經(jīng)受照射的血液來源樣品與供體受試者的循環(huán)系統(tǒng)斷開。

73、因此，在實施方案中，本發(fā)明的ecp處理是體外方法。在本發(fā)明方法的實施方案中，血液樣品是分離的血液樣品。在實施方案中，該方法是體外方法，并且血液樣品是分離的血液樣品。

74、如本文所用，術(shù)語“血液樣品”包括所有種類的血液來源樣品，包括血細(xì)胞樣品，諸如從血液產(chǎn)生的mnc樣品。

75、在本發(fā)明的實施方案中，受試者(血液供體和/或細(xì)胞的受體)表現(xiàn)出irae癥狀或患有irae。在另外的實施方案中，受試者已接受免疫檢查點(diǎn)抑制劑療法(icb)，但是檢查點(diǎn)抑制劑療法完成或在所述受試者中出現(xiàn)irae的癥狀和/或表現(xiàn)后停止。在實施方案中，irae的癥狀和/或表現(xiàn)在檢查點(diǎn)抑制劑療法停止后在受試者中出現(xiàn)。在實施方案中，irae的癥狀和/或表現(xiàn)在檢查點(diǎn)抑制劑療法停止后得以維持。

76、在本發(fā)明的實施方案中，在已接受免疫檢查點(diǎn)抑制劑療法(icb)并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)irae癥狀的受試者作為血液供體的情況下，血液樣品的提供和/或分離可在上述實施方案中描述的任何時間點(diǎn)發(fā)生。例如，樣品分離可在irae癥狀出現(xiàn)之前或之后進(jìn)行。此外，樣品分離可在檢查點(diǎn)抑制劑療法期間或停止所述療法之后進(jìn)行。

77、在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，在進(jìn)行檢查點(diǎn)抑制劑療法時，將由根據(jù)本發(fā)明的ecp處理產(chǎn)生的樣品或根據(jù)本發(fā)明使用的t細(xì)胞施用于受試者。

78、在優(yōu)選實施方案中，樣品分離發(fā)生在正在進(jìn)行的檢查點(diǎn)抑制劑療法期間，或者在irae癥狀出現(xiàn)之前或之后。通過在正在進(jìn)行的檢查點(diǎn)抑制劑療法期間向受試者施用樣品/細(xì)胞，可預(yù)防性地或治療性地使用由實施例的方法產(chǎn)生的樣品或細(xì)胞。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者可接受免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞，這些免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞優(yōu)選是自體的并且已通過根據(jù)本文所述的方法照射血液來源樣品產(chǎn)生，同時正在進(jìn)行檢查點(diǎn)抑制劑療法。此類實施方案是特別有利的，因為當(dāng)患者接受本發(fā)明的細(xì)胞和/或由本發(fā)明的方法產(chǎn)生的細(xì)胞時，可維持檢查點(diǎn)抑制劑療法，諸如抗癌檢查點(diǎn)抑制劑療法。

79、因此，在此類實施方案中，可向受試者施用檢查點(diǎn)抑制劑療法持續(xù)較長的時間段，因為施用經(jīng)照射的細(xì)胞預(yù)防irae的發(fā)生或改善irae，使得檢查點(diǎn)抑制劑療法可繼續(xù)。施用由本發(fā)明的方法產(chǎn)生的此類細(xì)胞，特別是本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)t細(xì)胞，不干擾受試者對檢查點(diǎn)抑制劑療法的抗癌應(yīng)答。與irae的已知治療/預(yù)防措施，特別是施用免疫抑制藥物(諸如皮質(zhì)類固醇)相比，這是一個重要的優(yōu)勢。進(jìn)行ecp沒有顯著改變檢查點(diǎn)抑制劑療法的抗癌作用，而同時施用糖皮質(zhì)激素(特定類別的皮質(zhì)類固醇)、特別是潑尼松龍則導(dǎo)致更差的結(jié)果，表明檢查點(diǎn)抑制劑治療的有效性降低。

80、此外，在經(jīng)歷向樣品添加光敏劑并對該樣品進(jìn)行照射的方法的(人)血液來源樣品用于治療和/或預(yù)防已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者的irae的實施方案中，無論血液來源樣品的來源(自體或異源)如何，樣品或由這種方法產(chǎn)生的細(xì)胞的施用可例如在irae癥狀出現(xiàn)之前或之后，和/或在檢查點(diǎn)抑制劑療法期間或在停止檢查點(diǎn)抑制劑療法之后進(jìn)行。

81、在實施方案中，受試者(血液供體和/或細(xì)胞的受體)患有癌癥，諸如惡性黑色素瘤或能夠通過檢查點(diǎn)抑制劑療法治療的另一種癌癥。

82、在實施方案中，受試者接受免疫抑制藥物，諸如類固醇、皮質(zhì)類固醇、環(huán)孢霉素和/或抗tnf抗體(例如英夫利昔單抗)，并且/或者是免疫抑制藥物難治的。

83、在本發(fā)明的實施方案中，(血液供體和/或細(xì)胞受體的)irae包括自身免疫性疾病的癥狀和/或由自身免疫反應(yīng)引起。在優(yōu)選實施方案中，irae包括或為自身免疫性結(jié)腸炎。

84、在實施方案中，irae包括選自包括以下的組的至少一種irae：自身免疫性結(jié)腸炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性甲狀腺炎和自身免疫性皮炎。

85、在實施方案中，irae包括選自包括以下的組的至少一種irae：免疫檢查點(diǎn)抑制劑相關(guān)的結(jié)腸炎、免疫檢查點(diǎn)抑制劑相關(guān)的肝炎、免疫檢查點(diǎn)抑制劑相關(guān)的甲狀腺炎和免疫檢查點(diǎn)抑制劑相關(guān)的皮炎。

86、施用由本文所述的方法產(chǎn)生的細(xì)胞諸如免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞，對已被施用以治療irae癥狀且免疫抑制藥物難治的irae患者具有治療效果。對于此類患者，尚無可用于改善irae癥狀的有效治療，因此本發(fā)明代表了治療這些患者的irae的完全出乎意料的可能性。

87、在實施方案中，檢查點(diǎn)抑制劑療法包括施用抗ctla4抗體和抗pd-1抗體中的至少一者。

88、在實施方案中，用于在已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者中治療和/或預(yù)防irae的免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞相對于所述受試者是自體的。在替代實施方案中，t細(xì)胞相對于所述受試者可以是異源的。

89、在實施方案中，在出現(xiàn)irae癥狀時施用根據(jù)本發(fā)明使用的包含脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和淋巴細(xì)胞(優(yōu)選(免疫調(diào)節(jié)性)t細(xì)胞)的組合藥物。在實施方案中，在irae癥狀發(fā)生后，將細(xì)胞施用1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、28周、30周、35周、40周、45周或50周，優(yōu)選至少1-3周，更優(yōu)選至少2周，并且在irae癥狀發(fā)生后，將脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)施用1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、12周、14周、16周、18周、20周、22周、24周、26周、28周、30周、35周、40周、45周或50周，優(yōu)選1-5周，更優(yōu)選至少3周。在實施方案中，在檢查點(diǎn)抑制劑療法正在進(jìn)行期間或在檢查點(diǎn)抑制劑療法停止或完成之后施用包含脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的組合藥物。

90、在組合藥物的實施方案中，將淋巴細(xì)胞(優(yōu)選(免疫調(diào)節(jié)性)t細(xì)胞)施用于受試者至少一次，優(yōu)選至少兩次，優(yōu)選連續(xù)幾天。因此，受試者可接受多于一個劑量的淋巴細(xì)胞/t細(xì)胞，其中優(yōu)選地每天施用不多于一個劑量。在另外的實施方案中，受試者接受至少2、3、4或5個劑量的本發(fā)明的淋巴細(xì)胞/t細(xì)胞。在實施方案中，至少每8周、優(yōu)選每2-4周將本發(fā)明的淋巴細(xì)胞/免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞施用于受試者。在實施方案中，在施用淋巴細(xì)胞/免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞之前、期間和/或之后施用脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)。在實施方案中，施用脂聯(lián)素至少一次、更優(yōu)選兩天一次，并且每天至少一次。

91、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，在施用檢查點(diǎn)阻斷療法后至少30分鐘施用脂聯(lián)素和/或ara和光敏劑。

92、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，受試者已被診斷患有和/或正患有癌癥。

93、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，光敏劑是補(bǔ)骨脂素試劑、優(yōu)選8-甲氧基補(bǔ)骨脂素。在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，uva照射的波長為3200埃至4000埃的波長。

94、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于組合使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，受試者患有癌癥。

95、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，癌癥選自包括以下的組：惡性黑色素瘤、乳腺癌或能夠通過檢查點(diǎn)阻斷療法治療的另一種癌癥。

96、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，檢查點(diǎn)阻斷療法包括施用至少一種抗體、優(yōu)選至少兩種抗體。

97、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，該至少一種抗體選自包括以下的組：細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞抗原4(ctla-4)、程序性細(xì)胞死亡蛋白-1(pd-1)和/或程序性細(xì)胞死亡配體-1(pd-l1)或淋巴細(xì)胞活化基因3(lag-3)。

98、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，irae可涉及任何器官，優(yōu)選胃腸道、肺、內(nèi)分泌腺、皮膚和/或肝臟。

99、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，irae包括icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

100、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，所述組合藥物減少icb誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

101、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，所述組合藥物誘導(dǎo)白細(xì)胞的凋亡，這些白細(xì)胞被腸巨噬細(xì)胞吞噬，從而引起發(fā)炎的腸道中的脂聯(lián)素產(chǎn)生。

102、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，所述組合藥物誘導(dǎo)所述受試者的發(fā)炎的腸中脂聯(lián)素、精氨酸酶-1(arg1)和致耐受性klrg1+btla+cd47+tox低t細(xì)胞的增加，但不誘導(dǎo)癌組織中脂聯(lián)素、精氨酸酶-1(arg1)和致耐受性klrg1+btla+cd47+tox低t細(xì)胞的增加。

103、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，由于組織特異性脂聯(lián)素誘導(dǎo)，所述組合藥物不干擾由抗pd1治療誘導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答。

104、在根據(jù)本發(fā)明的組合藥物或者說用于(組合)使用的物質(zhì)脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)和光敏劑的實施方案中，由腫瘤微環(huán)境中的t細(xì)胞介導(dǎo)的抗pd-1誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答不會因所述組合藥物而受損，其中完整的抗腫瘤免疫應(yīng)答通過回憶免疫實驗來證明。

105、在另一方面，本發(fā)明涉及用于治療腫瘤患者或患有癌癥的受試者的脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)，其中所述患者/受試者已出現(xiàn)免疫檢查點(diǎn)阻斷(icb)誘導(dǎo)的免疫相關(guān)不良事件(irae)，其中所述治療包括脂聯(lián)素和/或ara與抗腫瘤免疫療法的組合施用，其中所述免疫療法包括施用免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞和/或血液樣品。

106、在根據(jù)本發(fā)明的用于治療腫瘤患者的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，從包括以下步驟的方法獲得免疫調(diào)節(jié)性t細(xì)胞和/或血液樣品：

107、-提供源自所述患者的分離的血液樣品的樣品，

108、-向該樣品中加入光敏劑，以及使該樣品經(jīng)受照射。

109、在根據(jù)本發(fā)明的用于治療腫瘤患者的脂聯(lián)素和/或ara的實施方案中，光敏劑是8-甲氧基補(bǔ)骨脂素并且/或者照射是uva照射。

110、在另一方面，本發(fā)明涉及一種治療已接受檢查點(diǎn)抑制劑療法并且懷疑出現(xiàn)或已出現(xiàn)免疫相關(guān)不良事件(irae)的癥狀的受試者的方法，該方法包括在使所述受試者經(jīng)受體外光分離置換法(ecp)療法(諸如通過ecp系統(tǒng)的血液照射療法)之前、期間或之后，向所述受試者施用脂聯(lián)素和/或脂聯(lián)素受體激動劑(ara)至少一次。

111、在實施方案中，體外光分離置換(ecp)療法包括在對受試者的血液樣品或其片段施用uva照射之前向所述血液樣品或其片段施用光敏劑。

112、在本發(fā)明的一個方面的上下文中公開或描述的本發(fā)明的每個任選或優(yōu)選特征在此也公開于本文所述的本發(fā)明的其他方面的上下文中。

113、在用于治療和/或預(yù)防已接受本發(fā)明的檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者的免疫相關(guān)不良事件(irae)的ecp方法的上下文中公開的所有特征也涉及并且在此公開于本發(fā)明的體外方法、本發(fā)明的治療方法以及用于治療和/或預(yù)防已接受本發(fā)明的檢查點(diǎn)抑制劑療法的受試者的免疫相關(guān)不良事件(irae)的淋巴細(xì)胞和/或t細(xì)胞的上下文中，反之亦然。