本技術(shù)屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種抑制gpr75基因表達(dá)的sirna及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、g蛋白偶聯(lián)受體75基因(g-protein-coupled?receptor?75，gpr75)編碼含有540個氨基酸的膜蛋白受體，具有典型的g蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)特征，即7個跨膜結(jié)構(gòu)域，n端位于胞外，c端位于胞內(nèi)。gpr75基因在人體多個組織中表達(dá)，包括大腦、肝臟、腎臟、心臟等，它主要參與能量代謝、炎癥反應(yīng)及代謝紊亂等生理過程。

2、研究表明gpr75基因的過表達(dá)通過調(diào)控食欲、胰島素敏感性、血管張力及癌細(xì)胞遷移，直接促進(jìn)肥胖、糖尿病、心血管病、癌癥和脂肪肝等疾病。因此通過降低gpr75的表達(dá)水平，可以影響相關(guān)疾病的進(jìn)程，抑制gpr75基因的表達(dá)成為一種潛在的治療策略。

3、小干擾rna（sirna）是一種雙鏈rna分子，能夠通過rna干擾（rnai）機(jī)制特異性地沉默目標(biāo)基因的表達(dá)。sirna與目標(biāo)mrna互補(bǔ)配對，在dicer酶的作用下被加工成小片段，然后與rna誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（risc）結(jié)合，引導(dǎo)risc復(fù)合體切割目標(biāo)mrna，從而抑制其翻譯。開發(fā)針對gpr75基因的有效sirna能夠為相關(guān)疾病的治療提供新的思路。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本技術(shù)的目的在于提供一種抑制gpr75基因表達(dá)的sirna及其應(yīng)用，以為與gpr75基因的過表達(dá)相關(guān)的疾病提供一種新的治療策略。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本技術(shù)第一方面提供了一種抑制gpr75基因表達(dá)的sirna，包括正義鏈和反義鏈，所述反義鏈具有與seq?id?no.109~216、seq?id?no.226~231中任一項所示的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的核苷酸序列；所述正義鏈與所述反義鏈至少部分互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)。

3、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.1~108中任一項所示的核苷酸序列或seq?id?no.220~225中任一項所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?idno.109~216中或seq?id?no.226~231中與所述正義鏈對應(yīng)的一項所示的核苷酸序列。

4、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈和/或所述反義鏈中的至少一個核苷酸為修飾的核苷酸。

5、在一個或多個實施方式中，所述修飾包括2'-甲氧基修飾、2'-氟代修飾、硫代磷酸酯基修飾、乙烯基磷酸酯修飾和2'-脫氧核苷酸修飾中的一種或多種組合。

6、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，至少位于所述正義鏈的第1~6、8、12~21位的核苷酸為2'-甲氧基修飾的核苷酸，至少位于所述反義鏈的第1、3~5、7~9、11、13、15、17~21位的核苷酸為2'-甲氧基修飾的核苷酸。

7、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，至少位于所述正義鏈的第7、9~11位的核苷酸為2'-氟代修飾的核苷酸，至少位于所述反義鏈的第2、6、10、14、16位的核苷酸為2'-氟代修飾的核苷酸。

8、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，至少位于所述反義鏈的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間、第19位和第20位的核苷酸之間以及第20位和第21位的核苷酸之間通過硫代磷酸酯基連接。

9、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，至少位于所述反義鏈的第12位的核苷酸為2'-脫氧核苷酸。

10、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，至少位于所述反義鏈的第1位的核苷酸為乙烯基磷酸酯修飾的核苷酸。

11、在一個或多個實施方式中，按照5'端至3'端的方向，位于所述正義鏈的第1位和/或第21位的核苷酸連接有反向脫堿基核苷酸，位于所述正義鏈的第1位和/或第21位的核苷酸與所述反向脫堿基核苷酸之間通過硫代磷酸酯基連接。

12、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.55所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.163所示的核苷酸序列。

13、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.56所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.164所示的核苷酸序列。

14、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.57所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.165所示的核苷酸序列。

15、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.84所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.192所示的核苷酸序列。

16、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.86所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.194所示的核苷酸序列。

17、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.99所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.207所示的核苷酸序列。

18、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.220所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.226所示的核苷酸序列。

19、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.221所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.227所示的核苷酸序列。

20、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.222所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.228所示的核苷酸序列。

21、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.223所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.229所示的核苷酸序列。

22、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.224所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.230所示的核苷酸序列。

23、在一個或多個實施方式中，所述正義鏈具有seq?id?no.225所示的核苷酸序列，所述反義鏈具有seq?id?no.231所示的核苷酸序列。

24、在一個或多個實施方式中，所述sirna經(jīng)由接頭或載體與至少一個鏈上的一個或多個核苷酸偶聯(lián)或偶聯(lián)一個或多個靶向基團(tuán)或功能分子。

25、在一個或多個實施方式中，所述sirna的正義鏈和/或反義鏈內(nèi)部或末端偶聯(lián)有靶向基團(tuán)或功能分子。

26、在一個或多個實施方式中，所述靶向基團(tuán)為靶向轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(tfr)的小分子、多肽或抗體；所述功能分子為2'-o-十六烷基。

27、為了實現(xiàn)上述目的，本技術(shù)第二方面提供了一種上述任一實施方式所述的sirna在制備用于預(yù)防或治療與gpr75基因表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。

28、為了實現(xiàn)上述目的，本技術(shù)第三方面提供了一種gpr75抑制劑，包括上述任一實施方式所述的sirna。

29、為了實現(xiàn)上述目的，本技術(shù)第四方面提供了一種用于預(yù)防或治療與gpr75基因表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物，包括上述任一實施方式所述的sirna；以及藥學(xué)上可接受的載體。

30、區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本技術(shù)的有益效果是：

31、本技術(shù)提供了用于抑制gpr75基因表達(dá)的sirna，并對sirna進(jìn)行修飾以保證其穩(wěn)定性和抑制活性，實驗證明，本技術(shù)的多組sirna?對細(xì)胞中g(shù)pr75基因表達(dá)具有明顯抑制活性，其中，hgpr75_443am13、hgpr75_1347am13、hgpr75_1348am13、hgpr75_1349am13和hgpr75_1764am13在0.1?nm的濃度下對細(xì)胞中g(shù)pr75基因表達(dá)的抑制率均達(dá)到90%以上，展現(xiàn)出其在制備用于治療或預(yù)防人體內(nèi)與gpr75表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用前景；

32、本技術(shù)提供的sirna中，hgpr75_1348am13、hgpr75_1347am13和hgpr75_1764am13針對細(xì)胞中g(shù)pr75基因的半數(shù)抑制濃度ic50低于0.02?nm，表現(xiàn)出顯著的抑制活性；

33、本技術(shù)提供的sirna可采用兩種sirna混合進(jìn)行雙靶點沉默，且抑制活性優(yōu)于單一sirna，表現(xiàn)出協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，其中，hgpr75_1348am13+hgpr75_1764am13針對細(xì)胞中g(shù)pr75基因的半數(shù)抑制濃度ic50低于0.01?nm，具有非常突出的抑制活性。