本公開涉及抗體或其抗原結(jié)合片段、抗原結(jié)合蛋白構(gòu)建體(例如，雙特異性抗體)和抗體藥物綴合物。序列表本技術(shù)含有已經(jīng)與本文一起提交的序列表并且特此通過引用整體并入。創(chuàng)建于2023年11月28日的所述.xml副本命名為52501-0006wo1并且大小為41,620字節(jié)。

背景技術(shù)：

1、人表皮生長因子受體2(her2)(也被稱為erbb2)是屬于受體蛋白酪氨酸激酶的表皮生長因子受體亞家族的跨膜受體。her2在如乳腺癌和胃癌等各種癌癥類型中過表達，并且據(jù)報告是乳腺癌中的負面預(yù)后因素。

2、也被稱為腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子2(tacstd2)的滋養(yǎng)層細胞表面抗原2(trop2)是由tacstd2基因編碼和表達的細胞表面糖蛋白。trop2是與腫瘤密切相關(guān)的蛋白質(zhì)。主要通過調(diào)節(jié)鈣離子信號傳導(dǎo)通路、周期蛋白表達并減少纖連蛋白粘附來促進腫瘤細胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，trop2蛋白在乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、口腔鱗狀細胞癌和卵巢癌中高表達。所述蛋白可以促進腫瘤細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、擴散和其它過程。

3、考慮到her2和trop2在癌癥中的重要作用，需要開發(fā)靶向her2和/或trop2的治療劑。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本公開涉及抗her2抗體或其抗原結(jié)合片段、抗trop2抗體或其抗原結(jié)合片段、與兩種不同抗原(例如，her2和trop2)特異性結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白構(gòu)建體(例如，雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段)，以及涉及這些抗體或其抗原結(jié)合片段的抗體藥物綴合物。

2、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與her2(人表皮生長因子受體2)結(jié)合，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含：

3、重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域(vhh)，所述vhh包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述vhhcdr1區(qū)包含與所選vhh?cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述vhh?cdr2區(qū)包含與所選vhh?cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述vhh?cdr3區(qū)包含與所選vhh?cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，

4、其中所述所選vhh?cdr1、2、3氨基酸序列分別在seq?id?no:22、23和24中示出。

5、在一些實施例中，所述vhh包含氨基酸序列分別在seq?id?no:22、23和24中示出的cdr1、2、3。

6、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與her2結(jié)合，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域(vhh)，所述vhh包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列在seq?id?no:1中示出。

7、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段與her2特異性結(jié)合。

8、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是人源化抗體或其抗原結(jié)合片段。

9、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的所述vhh?cdr?1、2、3。

10、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含人igg?fc。

11、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含兩個或更多個重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域。

12、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段交叉競爭。

13、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與trop2(腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子2)結(jié)合，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含：

14、重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域(vhh)，所述vhh包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述vhhcdr1區(qū)包含與所選vhh?cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述vhh?cdr2區(qū)包含與所選vhh?cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述vhh?cdr3區(qū)包含與所選vhh?cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；

15、其中所述所選vhh?cdr1、2和3氨基酸序列是以下中的一項：

16、(1)所述所選vhh?cdr1、2、3氨基酸序列分別在seq?id?no:25、26和27中示出；

17、(2)所述所選vhh?cdr1、2、3氨基酸序列分別在seq?id?no:28、29和30中示出；以及

18、(3)所述所選vhh?cdr1、2、3氨基酸序列分別在seq?id?no:31、32和33中示出。

19、在一些實施例中，所述vhh包含氨基酸序列分別在seq?id?no:25、26和27中示出的cdr1、2、3。

20、在一些實施例中，所述vhh包含氨基酸序列分別在seq?id?no:28、29和30中示出的cdr1、2、3。

21、在一些實施例中，所述vhh包含氨基酸序列分別在seq?id?no:31、32和33中示出的cdr1、2、3。

22、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與trop2結(jié)合，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域(vhh)，所述vhh包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列選自由seq?id?no:2-12組成的組。

23、在一些實施例中，所述vhh包含seq?id?no:2的序列。

24、在一些實施例中，所述vhh包含seq?id?no:3的序列。

25、在一些實施例中，所述vhh包含seq?id?no:4的序列。

26、在一些實施例中，所述vhh包含seq?id?no:10的序列。

27、在一些實施例中，所述vhh包含seq?id?no:12的序列。

28、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段與trop2特異性結(jié)合。

29、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是人源化抗體或其抗原結(jié)合片段。

30、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的所述vhh?cdr?1、2、3。

31、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含人igg?fc。

32、在一些實施例中，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含兩個或更多個重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域。

33、一方面，本公開涉及一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段交叉競爭。

34、一方面，本公開涉及一種多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，所述多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包含：第一vhh(vhh1)，所述vhh1與her2特異性結(jié)合；第二vhh(vhh2)，所述vhh2與trop2特異性結(jié)合。

35、在一些實施例中，所述多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段進一步包含：第三vhh(vhh3)，所述vhh3與her2特異性結(jié)合；以及第四vhh(vhh4)，所述vhh4與trop2特異性結(jié)合。

36、在一些實施例中，所述vhh1和/或所述vhh3包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述cdr1區(qū)包含與所選cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述cdr2區(qū)包含與所選cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述cdr3區(qū)包含與所選cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述所選cdr1、2和3氨基酸序列在圖33中列出。

37、在一些實施例中，所述vhh1和/或所述vhh3包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列在seq?id?no:1中示出。

38、在一些實施例中，所述vhh2和/或所述vhh4包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述cdr1區(qū)包含與所選cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述cdr2區(qū)包含與所選cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述cdr3區(qū)包含與所選cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述所選cdr?1、2和3氨基酸序列在圖34中列出。

39、在一些實施例中，所述vhh3和所述vhh4包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列選自由seq?id?no:2-12組成的組。

40、在一些實施例中，所述多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包含人igg?fc。

41、在一些實施例中，所述vhh1和所述vhh3與所述人igg?fc的n末端或c末端連接。

42、在一些實施例中，所述vhh2和所述vhh4與所述人igg?fc的n末端或c末端連接。

43、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含

44、(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：第一重鏈抗體可變結(jié)構(gòu)域(vhh1)、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3和第二vhh(vhh2)；以及

45、(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：第三vhh(vhh3)、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3和第四vhh(vhh4)，

46、其中所述vhh1和所述vhh3與her2特異性結(jié)合，并且所述vhh2和所述vhh4與trop2特異性結(jié)合。

47、在一些實施例中，所述第一多肽包含與seq?id?no:18至少80％相同的序列；和/或其中所述第二多肽包含與seq?id?no:18至少80％相同的序列。

48、在一些實施例中，所述vhh2通過第一接頭肽序列與所述第一ch2和所述第一ch3的所述c末端連接。

49、在一些實施例中，所述vhh4通過第二接頭肽序列與所述第二ch2和所述第二ch3的所述c末端連接。

50、在一些實施例中，所述第一接頭肽序列和/或所述第二接頭肽序列與seq?id?no:34或35至少80％相同。

51、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含

52、(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、vhh2、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及

53、(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、vhh4、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2和第二ch3，

54、其中所述vhh1和所述vhh3與her2特異性結(jié)合，并且所述vhh2和所述vhh4與trop2特異性結(jié)合。

55、在一些實施例中，所述vhh1通過第一接頭肽序列與所述vhh2的所述n末端連接。

56、在一些實施例中，所述vhh3通過第二接頭肽序列與所述vhh4的所述n末端連接。

57、在一些實施例中，所述第一多肽包含與seq?id?no:17至少80％相同的序列；和/或其中所述第二多肽包含與seq?id?no:17至少80％相同的序列。

58、在一些實施例中，所述第一接頭肽序列和/或所述第二接頭肽序列與seq?id?no:34或35至少80％相同。

59、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含

60、(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh2、vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及

61、(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh4、vhh3、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2和第二ch3，

62、其中所述vhh1和所述vhh3與her2特異性結(jié)合，并且所述vhh2和所述vhh4與trop2特異性結(jié)合。

63、在一些實施例中，所述vhh2通過第一接頭肽序列與所述vhh1的所述n末端連接。

64、在一些實施例中，所述vhh4通過第二接頭肽序列與所述vhh3的所述n末端連接。

65、在一些實施例中，所述第一多肽包含與seq?id?no:15或21至少80％相同的序列；和/或其中所述第二多肽包含與seq?id?no:15或21至少80％相同的序列。

66、在一些實施例中，所述第一接頭肽序列和/或所述第二接頭肽序列與seq?id?no:34或35至少80％相同。

67、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含

68、(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh2、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3和vhh1；以及

69、(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh4、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3和vhh3，

70、其中所述vhh1和所述vhh3與her2特異性結(jié)合，并且所述vhh2和所述vhh4與trop2特異性結(jié)合。

71、在一些實施例中，所述第一多肽包含與seq?id?no:16或20至少80％相同的序列；和/或其中所述第二多肽包含與seq?id?no:16或20至少80％相同的序列。

72、在一些實施例中，所述vhh1通過第一接頭肽序列與所述第一ch2和所述第一ch3的所述c末端連接。

73、在一些實施例中，所述vhh3通過第二接頭肽序列與所述第二ch2和所述第二ch3的所述c末端連接。

74、在一些實施例中，所述第一接頭肽序列和/或所述第二接頭肽序列與seq?id?no:34或35至少80％相同。

75、在一些實施例中，所述vhh1和/或所述vhh3包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述cdr1區(qū)包含與所選cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述cdr2區(qū)包含與所選cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述cdr3區(qū)包含與所選cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述所選cdr1、2和3氨基酸序列在圖33中列出。

76、在一些實施例中，所述vhh1和/或所述vhh3包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列在seq?id?no:1中示出。

77、在一些實施例中，所述vhh2和/或所述vhh4包含互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，其中所述cdr1區(qū)包含與所選cdr1氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，所述cdr2區(qū)包含與所選cdr2氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述cdr3區(qū)包含與所選cdr3氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列；其中所述所選cdr?1、2和3氨基酸序列在圖34中列出。

78、在一些實施例中，所述vhh2和/或所述vhh4包含與所選vhh序列至少80％相同的氨基酸序列，其中所述所選vhh序列選自由seq?id?no:2-12組成的組。

79、一方面，本公開涉及一種核酸，所述核酸包含多核苷酸，所述多核苷酸編碼本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或本文所描述的多肽復(fù)合物。

80、在一些實施例中，所述核酸是dna(例如，cdna)或rna(例如，mrna)。

81、一方面，本公開涉及一種載體，所述載體包含本文所描述的核酸中的一種或多種核酸。

82、一方面，本公開涉及一種細胞，所述細胞包含本文所描述的載體。

83、在一些實施例中，所述細胞是cho細胞。

84、一方面，本公開涉及一種細胞，所述細胞包含本文所描述的核酸中的一種或多種核酸。

85、一方面，本公開涉及一種產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包含

86、(a)在足以使本文所描述的細胞產(chǎn)生所述抗體或所述抗原結(jié)合片段的條件下培養(yǎng)所述細胞；以及

87、(b)收集由所述細胞產(chǎn)生的所述抗體或所述抗原結(jié)合片段。

88、一方面，本公開涉及一種t細胞接合子(tce)，所述tce包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或本文所描述的多肽復(fù)合物。

89、一方面，本公開涉及一種嵌合抗原受體(car)，所述car包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或本文所描述的多肽復(fù)合物。

90、一方面，本公開涉及一種car-t、car-nk或car-nkt細胞，所述細胞包含本文所描述的car。

91、一方面，本公開涉及一種抗體藥物綴合物，所述抗體藥物綴合物包含與治療劑共價結(jié)合的本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或本文所描述的多肽復(fù)合物。

92、在一些實施例中，所述治療劑是細胞毒性劑或細胞抑制劑。

93、在一些實施例中，藥物與抗體比(dar)為4。

94、一方面，本公開涉及一種治療患有癌癥的受試者的方法，所述方法包含向所述受試者施用治療有效量的組合物，所述組合物包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多肽復(fù)合物、本文所描述的tce、本文所描述的car、本文所描述的car-t或car-nk或car-nkt細胞或本文所描述的抗體藥物綴合物。

95、在一些實施例中，所述受試者患有表達her2的癌癥。

96、在一些實施例中，所述受試者患有表達trop2的癌癥。

97、在一些實施例中，所述癌癥是胃癌、宮頸癌、食道癌、甲狀腺癌、膽管癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肺癌、乳腺癌、腎癌(kidney?cancer)、肝細胞癌、腎癌(renalcancer)、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、頭頸癌或晚期實體瘤。

98、在一些實施例中，所述癌癥是非小細胞肺癌(nsclc)。

99、一方面，本公開涉及一種降低腫瘤生長速率的方法，所述方法包含使腫瘤細胞與有效量的組合物接觸，所述組合物包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多肽復(fù)合物、本文所描述的tce、本文所描述的car、本文所描述的car-t或car-nk或car-nkt細胞或本文所描述的抗體藥物綴合物。

100、一方面，本公開涉及一種殺傷腫瘤細胞的方法，所述方法包含使腫瘤細胞與有效量的組合物接觸，所述組合物包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多肽復(fù)合物、本文所描述的tce、本文所描述的car、本文所描述的car-t或car-nk或car-nkt細胞或本文所描述的抗體藥物綴合物。

101、一方面，本公開涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多肽復(fù)合物、本文所描述的tce、本文所描述的car、本文所描述的car-t或car-nk或car-nkt細胞或本文所描述的抗體藥物綴合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑。

102、一方面，本公開涉及一種經(jīng)工程化的抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)eu編號，所述經(jīng)工程化的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈位置220處的絲氨酸殘基。

103、一方面，本公開涉及一種抗體藥物綴合物，所述抗體藥物綴合物包含經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)，所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)與治療劑共價結(jié)合，其中所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)包含c220s突變，其中根據(jù)eu編號，所述治療劑與位置226或229處的半胱氨酸殘基結(jié)合。

104、一方面，本公開涉及一種抗體藥物綴合物(adc)，所述adc包含經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)，所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)與治療劑共價結(jié)合，其中所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)包含位置220處的絲氨酸，其中根據(jù)eu編號，所述治療劑與位置226或229處的半胱氨酸殘基結(jié)合。

105、在一些實施例中，藥物與抗體比(dar)為1-4。

106、在一些實施例中，所述adc進一步包含vhh，其中所述vhh與所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)連接。

107、在一些實施例中，所述adc包含：

108、(1)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh2、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3；

109、(2)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、vhh2、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、vhh4、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3；或者

110、(3)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3和vhh2；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3、vhh4。

111、一方面，本公開涉及一種抗體藥物綴合物(adc)，所述adc包含經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)，所述經(jīng)工程化的鉸鏈區(qū)與治療劑共價結(jié)合，其中根據(jù)eu編號，所述治療劑與位置220、226或229處的半胱氨酸殘基結(jié)合。

112、在一些實施例中，藥物與抗體比(dar)為4-6。

113、在一些實施例中，所述adc包含：

114、(1)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh2、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3；

115、(2)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、vhh2、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、vhh4、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3；或者

116、(3)(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3和vhh2；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3、vhh4。

117、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2和第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh2、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2和第二ch3。

118、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3和vhh2；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2、第二ch3和vhh4。

119、一方面，本公開涉及一種多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物包含(a)第一多肽，所述第一多肽從n末端至c末端包含：vhh1、vhh2、第一鉸鏈區(qū)、第一ch2、第一ch3；以及(b)第二多肽，所述第二多肽從n末端至c末端包含：vhh3、vhh4、第二鉸鏈區(qū)、第二ch2和第二ch3。

120、在一些實施例中，所述vhh1和所述vhh3與第一腫瘤抗原特異性結(jié)合，并且所述vhh2和所述vhh4與第二腫瘤抗原特異性結(jié)合。

121、一方面，本公開涉及一種抗體藥物綴合物(adc)，所述adc包含本文所描述的多肽復(fù)合物，所述多肽復(fù)合物與有效載荷共價結(jié)合。

122、在一些實施例中，所述有效載荷選自由以下組成的組：細胞毒性劑、細胞抑制劑、放射性核素、生物活性蛋白、合成聚合物、酶、核酸(例如dna或rna)和其片段。

123、在一些實施例中，所述第一鉸鏈區(qū)和所述第二鉸鏈區(qū)中的每一個由2個半胱氨酸組成。

124、在一些實施例中，所述第一鉸鏈區(qū)和所述第二鉸鏈區(qū)中的每一個由3個半胱氨酸組成。

125、在一些實施例中，所述第一鉸鏈區(qū)和所述第二鉸鏈區(qū)中的每一個由2個半胱氨酸組成，其中藥物與抗體比(dar)為1.0-4.0。

126、在一些實施例中，所述第一鉸鏈區(qū)和所述第二鉸鏈區(qū)中的每一個由3個半胱氨酸組成，其中藥物與抗體比(dar)為4.0-6.0。

127、一方面，本公開涉及一種診斷疾病或病狀的方法，其中所述方法包含將樣品與組合物一起溫育，所述組合物包含本文所描述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本文所描述的多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或本文所描述的多肽復(fù)合物。

128、如本文所使用的，術(shù)語“抗體”是指含有至少一個(例如，一個、兩個、三個、四個、五個或六個)互補決定區(qū)(cdr)(例如，來自免疫球蛋白輕鏈的三個cdr中的任何一個cdr或來自免疫球蛋白重鏈的三個cdr中的任何一個cdr)并且能夠與表位特異性結(jié)合的任何抗原結(jié)合分子?？贵w的非限制性實例包括：單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、單鏈抗體、嵌合抗體、人抗體和人源化抗體。在一些實施例中，抗體可以含有人抗體的fc區(qū)。術(shù)語抗體還包括衍生物，例如，雙特異性抗體、單鏈抗體、雙功能抗體、線性抗體和由抗體片段形成的多特異性抗體。

129、如本文所使用的，術(shù)語“人抗體”是指由源自人的內(nèi)源性核酸(例如，重排的人免疫球蛋白重鏈或輕鏈基因座)編碼的抗體。在一些實施例中，人抗體從人類收集或在人細胞培養(yǎng)物(例如，人雜交瘤細胞)中產(chǎn)生。在一些實施例中，人抗體在非人細胞(例如，小鼠或倉鼠細胞系)中產(chǎn)生。在一些實施例中，人抗體在細菌或酵母細胞中產(chǎn)生。在一些實施例中，人抗體在含有未重排或重排的人免疫球蛋白基因座(例如，重鏈或輕鏈人免疫球蛋白基因座)的轉(zhuǎn)基因非人動物(例如，牛)中產(chǎn)生。

130、如本文所使用的，術(shù)語“嵌合抗體”是指含有至少兩個不同物種(例如，如人和小鼠抗體等來自兩種不同哺乳動物物種的抗體)中存在的序列的抗體。嵌合抗體的非限制性實例是含有非人(例如，小鼠)抗體的可變結(jié)構(gòu)域序列(例如，輕鏈和/或重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的全部或部分)和人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域的抗體。嵌合抗體的另外的實例在本文中進行描述，并且是本領(lǐng)域已知的。

131、如本文所使用的，術(shù)語“人源化抗體”是指含有源自非人(例如，小鼠)免疫球蛋白的最小序列并且含有源自人免疫球蛋白的序列的非人抗體。在非限制性實例中，人源化抗體是人抗體(受體抗體)，其中受體抗體的高變(例如，cdr)區(qū)殘基被來自非人抗體(例如，供體抗體)的高變(例如，cdr)區(qū)殘基替代，所述非人抗體例如具有期望的特異性、親和力和能力的小鼠、大鼠或兔抗體。在一些實施例中，人免疫球蛋白的fv框架殘基被對應(yīng)的非人(例如，小鼠)免疫球蛋白殘基替代。在一些實施例中，人源化抗體可以含有在受體抗體或供體抗體中未發(fā)現(xiàn)的殘基?？梢赃M行這些修飾以進一步優(yōu)化抗體性能。在一些實施例中，人源化抗體含有至少一個并且典型地兩個可變結(jié)構(gòu)域中的基本上所有可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有高變環(huán)(cdr)與非人(例如，小鼠)免疫球蛋白的那些區(qū)相對應(yīng)，并且所有或基本上所有框架區(qū)是人免疫球蛋白的那些區(qū)。人源化抗體還可以含有免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的分子生物學(xué)方法產(chǎn)生人源化抗體。本文描述了用于產(chǎn)生人源化抗體的方法的非限制性實例。

132、如本文所使用的，術(shù)語“抗原結(jié)合性蛋白構(gòu)建體”是：(i)單一多肽，所述單一多肽包括至少一個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；或者(ii)兩種或更多種多肽(例如，相同多肽或不同多肽)的復(fù)合物，所述兩種或更多種多肽一起形成至少一個或多個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。本文描述了抗原結(jié)合性蛋白構(gòu)建體的非限制性實例和方面?？乖Y(jié)合性蛋白構(gòu)建體的另外的實例和方面是本領(lǐng)域已知的。在一些實施例中，抗原結(jié)合蛋白構(gòu)建體具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個或多于8個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

133、如本文所使用的，術(shù)語“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”是指能夠與一種或多種不同抗原特異性結(jié)合的一個或多個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域(例如，由來自單一多肽的氨基酸形成或由來自兩種或更多種多肽(例如，相同或不同的多肽)的氨基酸形成)。在一些實例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可能以與天然存在的抗體相似的特異性和親和力結(jié)合到抗原或表位。在一些實施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以是抗體或其片段?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域的一個實例是由vh-vl二聚體形成的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在一些實施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是vhh。本文描述了抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的非限制性實例?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域的另外的實例是本領(lǐng)域已知的。在一些實例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與單個抗原結(jié)合。

134、如本文所使用的，術(shù)語“雙特異性抗體”是指與兩個不同的表位結(jié)合的抗體。表位可以在相同的抗原上或者在不同的抗原上。

135、如本文所使用的，術(shù)語“多特異性抗體”是指能夠與兩個或更多個不同的表位結(jié)合的抗體。表位可以在相同的抗原上或者在不同的抗原上。

136、如本文所使用的，“vhh”是指重鏈抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體的可變結(jié)構(gòu)域。在一些實施例中，vhh是人源化vhh。

137、如本文所使用的，當(dāng)提及抗體時，短語“特異性結(jié)合(specifically?binding)”和“特異性結(jié)合(specifically?binds)”意指抗體與其靶分子(例如，her2)相互作用，優(yōu)選地與其它分子相互作用，因為相互作用依賴于靶分子上特定結(jié)構(gòu)(即，抗原決定簇或表位)的存在；換句話說，試劑通常識別包括特定結(jié)構(gòu)的分子而非所有分子，并且與所述分子結(jié)合。與靶分子特異性結(jié)合的抗體可以被稱為靶特異性抗體。例如，與her2分子特異性結(jié)合的抗體可以被稱為her2特異性抗體或抗her2抗體。

138、除非另外定義，否則本文所使用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。本文描述了用于本發(fā)明的方法和材料；也可以使用本領(lǐng)域中已知的其它合適的方法和材料。材料、方法和實例僅僅是說明性的，并且不旨在進行限制。本文所提及的全部出版物、專利申請、專利、序列、數(shù)據(jù)庫條目和其它參考文獻均通過引用整體并入。在發(fā)生沖突的情況下，應(yīng)以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。

139、本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將通過以下詳細說明和附圖以及權(quán)利要求中變得清楚。