本發(fā)明屬于生物檢測，具體涉及一種用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合及應用。
背景技術：
1、成纖維細胞生長因子23（fgf23）屬于成纖維細胞生長因子家族的一員，編碼250個氨基酸的蛋白，是一種由骨細胞和成骨細胞分泌的蛋白質(zhì)，主要參與調(diào)節(jié)磷和維生素d的代謝，是哺乳動物體內(nèi)一種重要的激素。fgf23作用的靶器官是腎臟，并通過腎小球濾過從血漿中排出，能夠抑制腎小管對磷的重吸收，從而降低血磷水平。fgf23在貓的慢性腎臟病（ckd）中扮演著極其重要的角色。在慢性腎病早期，當腎小球濾過率（gfr）開始下降時，為了維持正常的血磷水平，機體會代償性地增加fgf23的分泌。因此，血清中fgf23濃度升高是貓ckd早期敏感的生物標志物，可用作?gfr?的替代。也有研究表明，血漿?fgf23?是貓氮質(zhì)血癥發(fā)生的預測因子，fgf23水平還可以預測ckd的進展和死亡風險，監(jiān)測fgf23水平也有助于評估限制磷攝入。此外，持續(xù)過高的fgf23水平可能促進ckd相關的心肌病變和血管鈣化，抑制性維生素d的產(chǎn)生，導致低血鈣，進而刺激甲狀旁腺激素（pth）的合成和分泌。
2、在貓慢性腎病的發(fā)展過程中，常伴隨著多種并發(fā)癥的出現(xiàn)，因此需要更多、更敏感的標志物來輔助診斷以減少誤診、漏診。fgf23水平檢測對于評估腎臟健康狀態(tài)和疾病預后具有重要意義，有助于更早識別腎臟功能下降，因此檢測貓血清中的fgf23濃度對貓慢性腎病的發(fā)病機制研究和臨床診斷及指導治療至關重要。建立對fgf23的檢測方法，有助于獲取關于動物個體代謝狀態(tài)的信息，為后續(xù)的相關研究提供數(shù)據(jù)支持。
技術實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的抗體組合能夠特異性識別貓fgf23重組蛋白和天然蛋白，具有高親和力和良好特異性?；谠摻M合構建的雙抗體夾心elisa檢測方法，以5a2作為包被抗體、3a1作為標記抗體，表現(xiàn)出良好的靈敏度（可檢測低至1?ng/ml的ffgf23重組蛋白）和特異性，可用于制備檢測試劑、試劑盒等工具，適用于對貓fgf23蛋白的體外檢測與分析，為相關研究提供可靠的技術支持。
2、為了達到上述目的，本發(fā)明采用的主要技術方案包括：
3、一種用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，單克隆抗體組合包括單克隆抗體5a2和單克隆抗體3a1；
4、單克隆抗體5a2的重鏈可變區(qū)包括三個互補決定區(qū)，互補決定區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.1-seq?id?no.3所示；
5、單克隆抗體5a2的輕鏈可變區(qū)包括三個互補決定區(qū)，互補決定區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.4-seq?id?no.6所示；
6、單克隆抗體3a1的重鏈可變區(qū)包括三個互補決定區(qū)，互補決定區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.7-seq?id?no.9所示；
7、單克隆抗體3a1的輕鏈可變區(qū)包括三個互補決定區(qū)，互補決定區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.10-seq?id?no.12所示。
8、在一些實施例中，單克隆抗體5a2的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.13所示；單克隆抗體5a2的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.14所示。
9、在一些實施例中，單克隆抗體3a1的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.15所示；單克隆抗體3a1的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.16所示。
10、在一些實施例中，編碼單克隆抗體5a2的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?idno.17所示；編碼單克隆抗體5a2的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.18所示。
11、在一些實施例中，編碼單克隆抗體3a1的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?idno.19所示；編碼單克隆抗體3a1的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.20所示。
12、在一些實施例中，貓fgf23蛋白包括貓fgf23重組蛋白和天然貓fgf23蛋白。
13、本發(fā)明提供基于上述的單克隆抗體組合在制備檢測貓fgf23蛋白的工具中的應用。
14、在一些實施例中，工具包括試劑、試劑盒、試紙條和抗體芯片。
15、在一些實施例中，試劑盒包括雙抗體夾心elisa試劑盒。
16、在一些實施例中，elisa試劑盒采用單克隆抗體5a2作為包被抗體，采用單克隆抗體3a1作為標記抗體。
17、另外，雙抗體夾心elisa檢測方法非用于疾病診斷和治療。
18、有益效果：
19、本發(fā)明提供了一種針對貓fgf23蛋白檢測的特異性高、靈敏度強的單克隆抗體組合，包括單克隆抗體5a2和3a1。通過對其重鏈和輕鏈可變區(qū)的互補決定區(qū)（cdr）序列設計與優(yōu)化，cdr氨基酸序列分別如seq?id?no.1至seq?id?no.12所示，該抗體組合能夠高效識別貓fgf23蛋白重組蛋白及天然貓fgf23蛋白，具有優(yōu)異的結合活性和檢測特異性。
20、基于該抗體組合構建的雙抗體夾心elisa檢測方法，具備較高的靈敏度，并且與其他無關抗原無交叉反應，顯著提升了檢測結果的準確性。本發(fā)明還提供了相關抗體可變區(qū)的氨基酸序列及其編碼核苷酸序列，為后續(xù)抗體的基因工程表達以及大規(guī)模生產(chǎn)奠定了基礎。
21、該抗體組合不僅適用于實驗室基礎研究，還可應用于動物健康監(jiān)測，開發(fā)針對貓fgf23蛋白的體外檢測產(chǎn)品，實現(xiàn)對動物個體代謝狀態(tài)的動態(tài)監(jiān)測，為理解貓的代謝調(diào)控機制提供了有力工具，具有重要的科研價值。
1.一種用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，所述單克隆抗體組合包括單克隆抗體5a2和單克隆抗體3a1；
2.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，所述單克隆抗體5a2的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.13所示；所述單克隆抗體5a2的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.14所示。
3.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，所述單克隆抗體3a1的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.15所示；所述單克隆抗體3a1的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.16所示。
4.根據(jù)權利要求2所述的用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，編碼所述單克隆抗體5a2的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.17所示；編碼所述單克隆抗體5a2的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.18所示。
5.根據(jù)權利要求3所述的用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，編碼所述單克隆抗體3a1的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.19所示；編碼所述單克隆抗體3a1的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no.20所示。
6.根據(jù)權利要求1所述的用于檢測貓fgf23蛋白的單克隆抗體組合，其特征在于，所述貓fgf23蛋白包括貓fgf23重組蛋白和天然貓fgf23蛋白。
7.基于權利要求1所述單克隆抗體的組合在制備檢測貓fgf23蛋白的工具中的應用。
8.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于，所述工具包括試劑、試劑盒、試紙條和抗體芯片。
9.根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于，所述試劑盒包括雙抗體夾心elisa試劑盒。
10.根據(jù)權利要求9所述的應用，其特征在于，所述elisa試劑盒采用單克隆抗體5a2作為包被抗體，采用單克隆抗體3a1作為標記抗體。