本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)營養(yǎng)食品，具體涉及促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物與制備工藝、應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、在創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，如何通過營養(yǎng)干預(yù)手段加速創(chuàng)面愈合進程、改善愈合質(zhì)量始終是臨床研究的重點。傳統(tǒng)治療手段多依賴外源性生長因子或抗生素類藥物，但存在生物利用度低、耐藥性風(fēng)險及單一作用機制局限性。近年來，以天然活性成分與生物技術(shù)結(jié)合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物逐漸成為研究熱點，然而現(xiàn)有技術(shù)仍有局限性。

2、膠原蛋白肽作為關(guān)鍵功能成分，其常規(guī)酶解工藝易破壞膠原蛋白特有的三螺旋結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致具有促愈合活性短肽段釋放不充分，直接影響成纖維細胞遷移能力。部分產(chǎn)品中雖然有有效成分，但成分單一，雖然可以提高創(chuàng)面愈合效果，但提高有限，愈合效率低。此外，作為一種口服營養(yǎng)產(chǎn)品，需要保證敏感有效成分受胃酸等環(huán)境的破壞，保證其具有較高的生物利用度，才能被人體吸收以發(fā)揮其功效。

3、因此，亟需開發(fā)一種復(fù)合肽營養(yǎng)組合物，能夠通過口服達到促進創(chuàng)面愈合的效果，通過豐富活性短肽段及有效成分含量，提高創(chuàng)面愈合速度和質(zhì)量，為術(shù)后傷口、創(chuàng)傷、潰瘍、皮炎等創(chuàng)面提供高效解決方案。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物與制備工藝、應(yīng)用，顯著提升了創(chuàng)面愈合速率與質(zhì)量，為術(shù)后傷口、創(chuàng)傷、潰瘍、皮炎等創(chuàng)面提供高效解決方案。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

3、一種促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物，其制備原料，按重量百分比計，包括魚膠原蛋白肽15%-25%、牛脾肽0.03%-0.05%、血蛋白低聚肽0.10%-0.30%、白蛋白肽0.10%-0.30%、人參粉0.01%-0.03%、復(fù)合發(fā)酵提取物15%-20%、植物提取物10%-20%、益生元20%-25%、乳清蛋白基質(zhì)補充余量至100%。

4、所述魚膠原蛋白肽的制備方法，包括以下步驟：a1、取膠原蛋白肽原料與檸檬酸鈉溶液混合攪拌，離心后水洗，得到脫礦魚鱗；

5、a2、往脫礦魚鱗中加水并調(diào)節(jié)ph，添加堿性蛋白酶，反應(yīng)，添加風(fēng)味蛋白酶反應(yīng)，滅酶，采用超濾膜超濾后凍干。

6、優(yōu)選的，所述魚膠原蛋白肽的制備方法，包括以下步驟：a1、取膠原蛋白肽原料與0.1m?檸檬酸鈉溶液混合，在0-4℃下攪拌10-14h，離心后水洗至中性，得到脫礦魚鱗；

7、a2、往脫礦魚鱗中加水并調(diào)節(jié)ph為7，添加堿性蛋白酶，在25℃下反應(yīng)1-3h后，添加風(fēng)味蛋白酶，在25℃下反應(yīng)1-3h，滅酶，先采用截留分子量3000da超濾膜得到超濾液，再用截留分子量為300da的超濾膜處理得到截留物料，得到的截留物料凍干。

8、優(yōu)選的，所述膠原蛋白肽原料包括魚鱗或魚皮。

9、優(yōu)選的，所述魚鱗包括羅非魚鱗；所述魚皮包括深海鱈魚皮。

10、優(yōu)選的，所述膠原蛋白肽原料與0.1m?檸檬酸鈉溶液的固液比為1g：（8-12）ml。

11、優(yōu)選的，所述脫礦魚鱗和水的質(zhì)量比為1：（4-6）。

12、優(yōu)選的，所述堿性蛋白酶的添加量為300-400u/g膠原蛋白肽原料。

13、優(yōu)選的，所述風(fēng)味蛋白酶的添加量為300-400u/g膠原蛋白肽原料。

14、優(yōu)選的，所述滅酶的條件為：溫度為85-90℃，時間為10-15min。

15、優(yōu)選的，所述凍干的條件為：在-40℃下預(yù)凍4h后，在溫度為-30℃、壓強為8-12pa下干燥24h。

16、通過先采用檸檬酸鈉對膠原蛋白肽原料進行脫礦處理，再采用雙階段酶解制備魚膠原蛋白肽，能夠提高產(chǎn)品促進創(chuàng)面愈合能力。這可能是因為采用檸檬酸鈉在低溫下脫鈣，能夠保護三螺旋結(jié)構(gòu)，而后通過分步酶解技術(shù)，首先利用堿性蛋白酶在定向切割膠原蛋白非螺旋區(qū)域的疏水性肽鍵，初步釋放大分子肽段；隨后添加風(fēng)味蛋白酶在相同溫度下進行深度水解，精準切割螺旋區(qū)特定位點，釋放gly-pro-hyp三肽等促愈合功能肽段，最后通過控制超濾膜的截留分子量，得到分子量集中的功能肽段，確保膠原蛋白肽生物活性的同時，促進腸道吸收率，從而提高膠原肽促成纖維細胞遷移率，加速創(chuàng)面愈合。通過分步酶解，避免因底物特異性重疊導(dǎo)致酶活性相互抑制，確保每種酶在最佳條件下獨立作用，顯著提高水解度和產(chǎn)物得率?？紤]成本因素，一般選用羅非魚鱗作為原料經(jīng)濟效益更高，但是深海鱈魚皮富含更高質(zhì)量的膠原蛋白、氨基酸及多種必需微量元素，生物活性也更高，能夠有效促進皮膚細胞再生與修復(fù)，多應(yīng)用于高端產(chǎn)品。在實際工業(yè)中，可以根據(jù)需求自行選擇羅非魚鱗或深海鱈魚皮。

17、優(yōu)選的，所述復(fù)合發(fā)酵提取物的制備方法，包括以下步驟：往培養(yǎng)基1上接種酵母菌，發(fā)酵后得到發(fā)酵產(chǎn)物1，加入蟲草菌絲得到培養(yǎng)基2，接種蟬花和蛹蟲草，培養(yǎng)后得到發(fā)酵產(chǎn)物2，添加積雪草粉得到培養(yǎng)基3，接種霉菌，發(fā)酵，得到發(fā)酵產(chǎn)物3，接種植物乳桿菌，發(fā)酵后，膜過濾，濃縮，噴霧干燥，即得。

18、優(yōu)選的，所述復(fù)合發(fā)酵提取物的制備方法，包括以下步驟：往培養(yǎng)基1上接種酵母菌，在28-32℃、120-180rpm下震蕩發(fā)酵72h后得到發(fā)酵產(chǎn)物1，加入蟲草菌絲得到培養(yǎng)基2，接種蟬花和蛹蟲草，23-25℃靜置培養(yǎng)10天后得到發(fā)酵產(chǎn)物2，添加積雪草粉得到培養(yǎng)基3，接種霉菌，28-30℃、180-220rpm震蕩發(fā)酵96h后，得到發(fā)酵產(chǎn)物3，接種植物乳桿菌，37℃厭氧發(fā)酵48h后，采用截留分子量為50kda的陶瓷膜過濾，在45℃下真空濃縮至固形物含量≥30%后，噴霧干燥，即得。

19、優(yōu)選的，所述酵母菌包括產(chǎn)朊假絲酵母。

20、優(yōu)選的，所述酵母菌的接種量為1×107cfu/g培養(yǎng)基1。

21、優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基1，按重量百分比計，包括大豆粕5%、蔗糖3%-4%、亞硒酸鈉0.01%、水補充余量至100%。

22、優(yōu)選的，所述蟲草菌絲的添加量與發(fā)酵產(chǎn)物1質(zhì)量一致。

23、優(yōu)選的，所述蟬花和蛹蟲草的接種量一致，均為2×107-3×107cfu/g培養(yǎng)基2。

24、優(yōu)選的，所述積雪草粉的添加量為發(fā)酵產(chǎn)物2質(zhì)量的2%-4%。

25、優(yōu)選的，所述霉菌包括紅曲霉和黑曲霉。

26、優(yōu)選的，所述紅曲霉的接種量為1×107-2×107cfu/g培養(yǎng)基3；所述黑曲霉的接種量為2×106-4×106cfu/g培養(yǎng)基3。

27、優(yōu)選的，所述植物乳桿菌的接種量為4×106-6×106cfu/g發(fā)酵產(chǎn)物3。

28、優(yōu)選的，所述真空濃縮的真空度為0.08-0.1mpa。

29、優(yōu)選的，所述噴霧干燥的具體條件為：進風(fēng)溫度為150-220℃，出風(fēng)溫度為80-100℃，霧化器轉(zhuǎn)速為20000-30000rpm。

30、通過制備復(fù)合發(fā)酵提取物，不僅能夠提高制備得到的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的免疫系統(tǒng)和抗炎效果，還能夠促進組織修復(fù)并且調(diào)節(jié)腸道菌群，通過多方協(xié)同效應(yīng)縮短愈合時間。這可能是因為首先以大豆粕為氮源，蔗糖為碳源，亞硒酸鈉為硒源，通過產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵實現(xiàn)硒的生物轉(zhuǎn)化，生成硒代蛋氨酸等有機硒形態(tài)，同時產(chǎn)生能夠軟化后續(xù)蟲草菌絲體細胞壁的乙醇酸，并為后續(xù)發(fā)酵提供預(yù)處理底物。然后將階段1發(fā)酵液與蟲草菌絲體混合，并接種蟬花與蛹蟲草，蟬花分泌漆酶降解菌絲體幾丁質(zhì)骨架，蛹蟲草產(chǎn)生蟲草素前體物質(zhì)，二者協(xié)同作用提高產(chǎn)物中蟲草素含量。接著添加積雪草粉，并接種紅曲霉和黑曲霉，紅曲霉分泌紅曲色素抑制雜菌，黑曲霉產(chǎn)生糖化酶活化三萜皂苷，二者協(xié)同大大提高了三萜類化合物的轉(zhuǎn)化率，同時產(chǎn)生的積雪草苷與紅景天提取物中的紅景天苷產(chǎn)生協(xié)同抗氧化效應(yīng)。最后接種植物乳桿菌進行厭氧發(fā)酵，通過乳酸菌代謝產(chǎn)生短鏈脂肪酸，降低體系ph，促進活性成分溶出，提高最終產(chǎn)物中γ-氨基丁酸（gaba）含量，顯著提升組合物的抗炎活性。最終得到的復(fù)合發(fā)酵提取物富含蟲草素、硒代蛋氨酸、積雪草苷、γ-氨基丁酸、短鏈脂肪酸等有效成分，他們協(xié)同作用能夠縮短創(chuàng)面炎癥期，促進成纖維細胞增殖與膠原合成，提升肉芽組織形成速度，抑制瘢痕過度形成，達到加快創(chuàng)面愈合的效果。

31、通過選用遞進式發(fā)酵方法，將上一發(fā)酵過程的產(chǎn)物作為下一發(fā)酵過程的底物，相較單獨發(fā)酵來說，能夠進一步提高活性成分的生成，同時提高植物乳桿菌的轉(zhuǎn)化效率，進而提高最終產(chǎn)物中有效成分的含量，提高復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的創(chuàng)面愈合效果及效率。這可能是因為一方面本發(fā)明的發(fā)酵流程有代謝物級聯(lián)放大效應(yīng)，階段1的硒代異黃酮可誘導(dǎo)階段2蟬花產(chǎn)蟲草素，而階段2的蟲草素又可抑制階段3紅曲霉的雜菌污染風(fēng)險，提高霉菌反應(yīng)效率，植物乳桿菌可以降解紅曲霉發(fā)酵產(chǎn)生的植酸等副產(chǎn)物。另一方面階段3紅曲霉和黑曲霉耦合發(fā)酵中，黑曲霉產(chǎn)生的纖維素酶可釋放積雪草細胞壁中的三萜皂苷，提高產(chǎn)物修復(fù)愈合效果。此外，遞進式發(fā)酵液中含有豐富氨基酸、短鏈脂肪酸，可為階段4植物乳桿菌提供碳源，促進其生物轉(zhuǎn)化效率，提高復(fù)合發(fā)酵提取物中各項有效成分含量。而且遞進式發(fā)酵方法避免制備多種有效成分的復(fù)雜工藝及各環(huán)節(jié)分離純化，降低了成本。

32、優(yōu)選的，所述植物提取物包括綠茶提取物、紅景天提取物。

33、優(yōu)選的，所述綠茶提取物、紅景天提取物的質(zhì)量比為（3-5）：1。

34、優(yōu)選的，所述綠茶提取物的制備方法，包括以下步驟：

35、b1、取綠茶干燥后研磨過60目篩得到綠茶粉，加入質(zhì)量分數(shù)為65%-75%的乙醇水溶液，超聲輔助提取后過濾，45℃旋蒸濃縮至綠茶粉質(zhì)量的1-3倍得濃縮液；

36、b2、取濃縮液、壁材液和乳化劑混合，均質(zhì)兩次后冷凍干燥，粉碎過100目篩，即得。

37、優(yōu)選的，所述綠茶粉和質(zhì)量分數(shù)為65%-75%的乙醇水溶液的固液比為1g：（14-16）ml。

38、優(yōu)選的，所述超聲輔助提取的具體條件為：頻率為38-42khz，功率為220-270w，時間為25-35min，溫度為25-35℃。

39、優(yōu)選的，所述壁材液的組分，按壁材液的重量百分比計，包括海藻酸鈉2%、果膠0.5%、水補充余量至100%。

40、優(yōu)選的，所述乳化劑為卵磷脂，添加量為濃縮液質(zhì)量的0.1%。

41、優(yōu)選的，所述濃縮液和壁材液的體積比為1:3。

42、優(yōu)選的，所述均質(zhì)的壓力為75-85mpa，均質(zhì)時間為3-5min。

43、優(yōu)選的，所述冷凍干燥的條件為：在-40℃下預(yù)凍2h后，在溫度為-30℃、壓強為8-12pa下干燥24h。

44、優(yōu)選的，所述紅景天提取物中，紅景天苷的含量≥3%。

45、在一些優(yōu)選的方案中，所述紅景天提取物來自西安天一生物技術(shù)股份有限公司。

46、通過采用海藻酸鈉-果膠復(fù)合壁材對綠茶提取物進行納米乳化包埋，能夠提高其口服生物利用度，抵抗胃酸，提高有效成分egcg等的保留率，從而提高生物利用度。這可能是因為相較穩(wěn)定性更高的紅景天提取物中的有效成分紅景天苷，綠茶提取物中的有效成分egcg等穩(wěn)定性差，易受光、熱、氧化等影響，在胃酸中易降解，因此口服無法發(fā)揮綠茶提取物的效果。因此需對其進行乳化包埋。海藻酸鈉與果膠形成雙層壁材，通過靜電復(fù)合穩(wěn)定微膠囊結(jié)構(gòu)；卵磷脂降低界面張力，高壓均質(zhì)實現(xiàn)納米級乳化；冷凍干燥保留微膠囊完整性，從而能夠控制egcg等有效成分的釋放速率，延長其在創(chuàng)面部位的滯留時間，提升抗氧化和抗炎效果，同時還能夠與紅景天苷協(xié)同減少膠原蛋白降解。

47、優(yōu)選的，所述益生元包括抗性糊精和低聚半乳糖。

48、優(yōu)選的，所述抗性糊精和低聚半乳糖的質(zhì)量比為1：（1-2）；進一步優(yōu)選的，為2:3。

49、優(yōu)選的，所述乳清蛋白基質(zhì)，按乳清蛋白基質(zhì)的重量百分比計，其組分包括乳糖5%-10%、維生素c?1%-2%、乳清蛋白粉補充余量至100%。

50、優(yōu)選的，所述維生素c為l-抗壞血酸。

51、在一些優(yōu)選的方案中，本發(fā)明所述復(fù)合肽營養(yǎng)組合物中還可加入適量維生素，包括但不限于維生素b1、維生素b2、維生素b6，添加量為復(fù)合肽營養(yǎng)組合物質(zhì)量的0.01%-0.02%。

52、本發(fā)明第二方面提供了所述促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的制備工藝，包括以下步驟：

53、s1、將魚膠原蛋白肽、牛脾肽、血蛋白低聚肽、白蛋白肽、益生元和乳清蛋白基質(zhì)制粒，破碎，得到混合物；

54、s2、往混合物中依次加入人參粉、復(fù)合發(fā)酵提取物、植物提取物，混合，即得。

55、優(yōu)選的，所述制備工藝包括：

56、s1、將魚膠原蛋白肽、牛脾肽、血蛋白低聚肽、白蛋白肽、益生元和乳清蛋白基質(zhì)置于混合機中干混制粒，破碎至粒徑≤40目，得到混合物；

57、s2、往混合物中依次加入人參粉、復(fù)合發(fā)酵提取物、植物提取物，氮氣保護進行混合，即得。

58、所述步驟s1中，干混制粒的具體條件為：轉(zhuǎn)速為15-25rpm，混合時間為5-15min，輥壓壓力60-70kn，輥間距0.8-1.2mm。

59、所述步驟s2中，混合的具體條件為：轉(zhuǎn)速為5-15rpm，混合時間為10-20min。

60、本發(fā)明第三方面提供了所述促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的應(yīng)用，應(yīng)用于醫(yī)學(xué)營養(yǎng)食品領(lǐng)域，包括術(shù)后傷口、創(chuàng)傷、潰瘍、皮炎等。

61、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為：

62、1.本發(fā)明提供一種促進創(chuàng)面愈合的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物，通過自制魚膠原蛋白肽、復(fù)合發(fā)酵提取物等原料，提高了促愈合肽段和抗炎修復(fù)等多種活性成分的含量，并通過包埋技術(shù)提高植物提取物的生物利用度，從而顯著提升了創(chuàng)面愈合速率與質(zhì)量，尤其是對于腫瘤放化療的醫(yī)源性創(chuàng)面以及壓褥瘡，糖尿病病足，燒傷等難愈性創(chuàng)面也具有優(yōu)異的愈合效果，為術(shù)后傷口、創(chuàng)傷、潰瘍、皮炎等創(chuàng)面提供高效解決方案。

63、2.本發(fā)明通過先采用檸檬酸鈉對魚鱗/魚皮進行脫礦處理，再采用雙階段酶解制備魚膠原蛋白肽，能夠提高產(chǎn)品促進創(chuàng)面愈合能力。

64、3.本發(fā)明通過制備復(fù)合發(fā)酵提取物，不僅能夠提高制備得到的復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的免疫系統(tǒng)和抗炎效果，還能夠促進組織修復(fù)并且調(diào)節(jié)腸道菌群，通過多方協(xié)同效應(yīng)縮短愈合時間。

65、4.本發(fā)明通過選用遞進式發(fā)酵方法，將上一發(fā)酵過程的產(chǎn)物作為下一發(fā)酵過程的底物，相較單獨發(fā)酵來說，能夠進一步提高活性成分的生成，同時提高植物乳桿菌的轉(zhuǎn)化效率，進而提高最終產(chǎn)物中有效成分的含量，提高復(fù)合肽營養(yǎng)組合物的創(chuàng)面愈合效果及效率。

66、5.本發(fā)明通過采用海藻酸鈉-果膠復(fù)合壁材對綠茶提取物進行納米乳化包埋，能夠提高其口服生物利用度，抵抗胃酸，提高有效成分egcg等的保留率，從而提高生物利用度。